Details

1.Remove the culture medium from the culture plate, digest the cells with pancreatin enzyme, add an appropriate amount of culture medium to blow the cells off the culture plate. Suspension cells can be omitted.

2.Collect the cell suspension, centrifuge at 1000×g for 10 minutes, discard the culture medium, and wash with pre-cooled PBS for 3 times.

3.Add an appropriate amount of pre-cooled PBS to resuspend the cells. Usually, the cell amount of one well of a 6-well plate needs 150~250μL PBS to resuspend.

4.Put the sample into -20℃ or -80℃ to freeze the sample, then take it out and thaw it at room temperature. Freeze and thaw the sample for several times, so that the cells are fully lysed. The sample can also be sonicated to achieve the purpose of lysis.

5.Centrifuge at 4℃ and 10000×g for 10 minutes, remove the cell fragments, take the supernatant, and store it at -20℃ or -80℃ to avoid repeated freezing and thawing.

1） 吸去培养板内的培养基，用胰酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可
省略。
2） 收集细胞悬液，1000×g 离心10min，弃去培养基，用预冷的 PBS 润洗3次。
3） 加入适量的预冷 PBS 重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS 重悬。
4） 将样品放入-20℃或-80℃，使样品冷冻，再放室温解冻样品，反复冻融几次，使细胞充分裂解。
也可将样品进行超声破碎，以达到裂解的目的。
5） 4℃ 10000×g 离心10min，除去细胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。